خدمات ژنتیک مولکولی دیبا، مجموعهای از روشهای آمادهسازی و سنجش DNA و RNA، واکنشهای PCR و آزمونهای پروتئینی را پوشش میدهد. انتخاب روش مناسب به نوع نمونه، هدف پژوهش و مشخصات آزمون بستگی دارد.
هر یک از خدمات زیر بر اساس نیاز پروژه و مشخصات نمونه قابل بررسی و برنامهریزی است. برای انتخاب دقیق دامنه کار، توضیحات و نیازمندیهای پژوهش خود را آماده کنید.
جداسازی DNA از نمونههای زیستی و آمادهسازی آن برای آزمونهایی مانند PCR، ژنوتایپینگ و بررسیهای مولکولی. نوع نمونه و روش استخراج بر اساس ماده اولیه و کاربرد موردنظر انتخاب میشود.
جداسازی RNA با رعایت ملاحظات کنترل آلودگی RNase و آمادهسازی نمونه برای سنتز cDNA، بررسی بیان ژن و آزمونهای مبتنی بر RNA.
اندازهگیری غلظت DNA یا RNA و ارزیابی شاخصهای اولیه خلوص؛ نتایج برای تصمیمگیری درباره کفایت نمونه در مراحل بعدی آزمایش گزارش میشوند.
تبدیل RNA به DNA مکمل (cDNA) با استفاده از واکنش رونویسی معکوس؛ cDNA حاصل میتواند در آزمونهای بیان ژن و PCR استفاده شود.
اندازهگیری مقدار بیان یا فراوانی هدف ژنی به روش نسبی با مقایسه ژن مرجع، یا به روش مطلق با استفاده از استاندارد و منحنی کالیبراسیون.
پایش تکثیر محصول PCR در طول چرخهها و تحلیل دادههایی مانند Cq، منحنی تکثیر و در صورت وجود استاندارد، بازده و منحنی کالیبراسیون.
تکثیر ناحیه ژنی موردنظر و سپس هضم محصول با آنزیم محدودکننده برای بررسی الگوهای قطعهای؛ این روش برای شناسایی برخی تفاوتهای توالی یا چندشکلیها کاربرد دارد.
واکنش PCR اختصاصی آلل برای بررسی حضور یک نوکلئوتید یا واریانت شناختهشده، با استفاده از پرایمرهایی که به تفاوت توالی هدف حساساند.
تکثیر قطعات نسبتاً بلند DNA با سامانههای پلیمرازی و شرایط واکنش متناسب با طول و ویژگی ناحیه هدف؛ طراحی آزمون به کیفیت الگو و توالی وابسته است.
اندازهگیری کمی RNA از طریق تبدیل اولیه RNA به cDNA و سپس پایش تکثیر با Real-time PCR؛ مناسب برای بررسی کمی بیان ژن.
جداسازی پروتئینها بر اساس وزن مولکولی تقریبی با الکتروفورز ژل پلیآکریلآمید در حضور SDS؛ برای بررسی الگوی پروتئینی و آمادهسازی نمونه وسترن بلات کاربرد دارد.
شناسایی پروتئین یا نشانگر پروتئینی مشخص پس از جداسازی، انتقال به غشا و آشکارسازی با آنتیبادی اختصاصی؛ نوع آنتیبادی و کنترلها باید متناسب با هدف تعیین شوند.
تبدیل RNA به cDNA و تکثیر توالی هدف با PCR برای بررسی وجود یا شناسایی رونوشت موردنظر؛ این عنوان به روش کیفی یا نقطهپایانی اشاره دارد.
تکثیر همزمان چند ناحیه هدف در یک واکنش؛ طراحی و بهینهسازی مجموعه پرایمرها برای کاهش تداخل و دستیابی به تکثیر قابل تفکیک اهمیت دارد.
جداسازی و مشاهده DNA، RNA یا برخی نمونههای پروتئینی بر اساس اندازه و ویژگیهای مولکولی؛ نوع ژل و شرایط اجرا با ماهیت نمونه و هدف آزمون تنظیم میشود.
روش مبتنی بر تکثیر اختصاصی جهش برای بررسی واریانتهای شناختهشده؛ طراحی پرایمر بهگونهای است که اختلاف باز در محل هدف بر تکثیر اثر بگذارد.
تحلیل تغییرات منحنی ذوب محصول PCR برای غربالگری تفاوتهای توالی مانند برخی SNPها یا تغییرات ژنتیکی؛ تفسیر نتایج به کنترلهای مناسب و الگوی مرجع نیاز دارد.
بررسی الگوی متیلاسیون نواحی مشخص DNA پس از آمادهسازی شیمیایی مناسب نمونه و استفاده از پرایمرهای اختصاصی توالیهای متیله یا غیرمتیله.
تکثیر ماده ژنتیکی حاصل از یک سلول منفرد برای بررسی هدفهای ژنی؛ جداسازی سلول، کنترل آلودگی و محدودیت مقدار ماده اولیه در این روش اهمیت ویژه دارد.
برآورد غلظت پروتئین کل با روش رنگسنجی برادفورد و مقایسه جذب نمونه با منحنی استاندارد؛ مناسب برای سنجش اولیه پروتئین پیش از برخی آزمونهای پاییندستی.
نوع نمونه، تعداد، هدف آزمایش، خروجی مورد انتظار و محدودیت زمانی از اطلاعاتی هستند که به بررسی و برآورد دقیقتر درخواست کمک میکنند.